ساخت سازه ژنی جهت بیان پروتئین l-hdag هپاتیت دلتا در رده سلولیhuh7

ویروسhdv دارای دو آنتی ژن می باشد. یک آنتی ژن 24 دالتونی با نام s-hdag و آنتی ژن 27 دالتونی به نام l-hdag . این دو آنتی ژن کاملا شبیه هم هستند با این تفاوت که l-hdag ، 19 اسید آمینه اضافی در c ترمینال دارد. s-hdag در همانند سازی و ورود ویروس به هسته و l-hdag برای بسته بندی ویروس و پایان همانند سازی مورد نیاز می باشند. در این تحقیق، تکنیک جهش زایی هدفدار بر پایهpcr و به روش overlap extention، طی سه مرحله و با دو جفت پرایمر مختلف بر روی cdna این ویروس انجام شد. قطعه dna حاصل در وکتور واسطه کلون شده و بعد از تأیید تغییرات اعمال شده توسط توالی یابی، در وکتور بیان pcdna3.1- و در سلولهای huh7 و hek293 بیان گردید. سنجش پروتئین حاصله توسط ایمیونوسایتو شیمی و الکتروفورز بر روی ژل پلی آکریل آمید در حضور سدیم دودسیل سولفات (sds-page) و westernblot با استفاده از آنتی بادی حاصل از سرم بیمار که دارای تیتر مناسبی برای hdvag بود انجام پذیرفت. با توالی یابی hdvag جهش یافته، صحت انجام مراحل جهش زایی و کلونینگ تأیید گردید. بیان این پروتئین نو ترکیب در سلولهای hek293 و huh7به خوبی صورت گرفته و روش های انجام شده جهت سنجش محصول بیان نیز ماهیت آن را تأیید نمودند. در این پژوهش سعی شده تا آنتی ژن نوترکیبی ((l-hdag از ویروس تولید شود. این آنتی ژن را می تواند در طراحی کیتهای تشخیصی، مطالعات ایمونولوژیک از قبیل dna vaccine وهمچنین از این ساختار می توان برای ساخت وکتور(جهت انتقال قطعات ژنومی از قبیل رایبوزوم) و سایر مطالعات در مورد ویروس دلتا به نحوی که این آنتی ژن در آن دخیل می باشد، مورد استفاده قرار داد. کلمات کلیدی:hdv, soeing-pcr , l-hdag